文件編號：GWI-Q-02-14

微生物檢驗程序-總生菌數

版次：第1版
發佈日期：2026-04-13

文件修訂履歷

版次	日期	文件名稱	制訂人
第1版	2026-04-13	微生物檢驗程序-總生菌數	葉嘉岑

簽核紀錄

角色	姓名	日期
制訂人	葉嘉岑	2026-04-13
覆核人	呂盈嬅	2026-04-13
核定人	潘芸榕	2026-04-13

檢驗方式: 總生菌數套組微生物檢驗法(Aerobic Count Plates)

檢測儀器

1. 高壓滅菌釜(溫度能保持121度C，壓力15lb/in2或1.1kg/cm2)
2. 磅秤(精度0.01g)
3. 無菌操作檯(經紫外燈照射隔夜，或75%酒精噴灑無菌空間)
4. 試管震盪器(能使試管內無菌水與樣品均勻混合)
5. 微生物培養恆溫箱(溫度恆溫+/-2度C)
6. 冰箱(存放總生菌數套組使用)

器材使用前準備

將以下欲使用無菌要求器材(註記*號)用鋁箔紙包好後(玻璃吸管需放入吸管鐵盒中)，放高壓滅菌釜內設定(溫度能保持121度C，壓力15lb/in2或1.1kg/cm2)消毒十五分鐘以上，或使用75%酒精消毒後烘乾，備用。

使用器材與試藥

1. 3M總生菌數套組(3M Petrifilm Aerobic Count Plates)或CHISSO總生菌數套組(Aerobic Count)
2. 無菌有刻度玻璃吸管(1cc，10cc)*
3. 無菌含蓋採樣瓶(30ml)*
4. 600ml血清瓶
5. 稀釋中和液*, 參照稀釋中和液配製方法(WI-Q-02-24)
6. 鋁箔紙
7. 試管架
8. 不鏽鋼金屬挖棒*
9. 內裝填75%酒精噴瓶
10. 15mL含蓋玻璃試管*, 若為檢測高黏度化粧品, 可加入直徑2~3mm玻璃珠*數顆。
11. 滅菌之純水(環境落菌測試用)

一. 適用範圍

本方法適用於：

1. 環境落菌檢測。
2. 水類, 液態原料之微生物檢驗。
3. 化粧品液劑, 乳劑, 霜類樣品微生物檢驗。
4. 手部, 器具, 設備等表面微生物測試, 使用直接接觸法檢測。

二. 樣品製備

1. 稀釋中和液配製: 視樣品量配製，參照稀釋中和液配製方法(WI-Q-02-24)配製，並依所需備製樣品稀釋量需求，等比例增加量，攪拌溶解後，倒入血清瓶中，或分裝於含蓋試管中，每支裝入9mL。放入高壓滅菌釜內設定(溫度能保持121度C，壓力15lb/in2或1.1kg/cm2)消毒十五分鐘以上，備用。
2. 水質與液態原料微生物: 使用75%酒精瓶噴槍，將欲取樣口與器具外觀噴酒精消毒，待酒精揮發後，進行取樣。若為純水, 則流放前段的水，拿取已消毒好之取樣瓶裝水樣，立刻蓋上瓶蓋，待測。水樣應在取樣當日檢測。
3. 化妝品: 取原樣，倒入已消毒好的取樣瓶中待測，或直接拿取樣品待測。因化粧品多數含防腐成份, 須以稀釋中和液處理後再進行分析。
4. 表面微生物測試: 可直接取以二-5項處理之測試片, 對待測樣品進行測試。
5. 環境落菌與表面菌數之測試片製備: 在無菌操作下，將測試片打開，加入1c.c.無菌純水或稀釋中和液，蓋上貼片紙，(3M測試片需使用測試片外包盒上塑膠模壓製，將測試片內空氣擠出)，靜置一小時，待培養基凝固，備用。已加入無菌水之培養基儲存方式可置於一般密封夾鏈袋內，確實密封袋口，放入冰箱冷藏，可存放十四天。
6. 化粧品樣品稀釋: 視樣品微生物污染程度如下述步驟進行1/10，1/100稀釋。若需要時可同理進行更高倍(1/1000, 1/10000...)序列稀釋。
   • 1/10稀釋樣品備製: 使用消毒後裝填9c.c.稀釋中和液之玻璃試管，拿取已消毒好挖棒或1mL吸管，取1mL或1.0克待測原樣進入玻璃試管內，將蓋子蓋起，放置試管震盪器上震盪，使待測樣與稀釋中和液勻均混合，標示後，放置試管架上待測。
   • 1/100稀釋樣品備製: 使用消毒後裝填9c.c.稀釋中和液之玻璃試管，拿取已消毒好玻璃吸管，吸取1c.c.的1/10倍稀釋樣品，進入玻璃試管內，將蓋子蓋起，放置試管震盪器上震盪，使待測樣與稀釋中和液勻均混合，標示後，放置試管架上待測。

三. 環境落菌與表面總生菌數操作流程

步驟	說明	操作注意事項
1.接種	1.環境落菌: 1.1.拿取二-5.已備置完成測試片, 使用長尾夾夾住測試片上端，並於夾子上方黏貼雙面膠帶。1.2.完全打開測試片上蓋，使上蓋黏貼於雙面膠上。(若無夾子亦可使用膠帶黏貼，靜置於待測環境15分鐘。) 1.3.15分鐘後，將上蓋蓋起。1.4.於測試片貼上標籤。2.表面總菌數: 2.1.拿取二-5.已備置完成測試片，翻開上蓋, 翻開時應避免觸碰測試片培養基區域。2.2.將測試片培養基區域接觸要測試物的表面，以手指按壓，使其完全接觸，若測手部菌數，可翻開測試片，直接以手指觸碰測試片培養基區域。2.3.將上層膜蓋上，於測試片貼上標籤。	1.使用測試片，不可碰觸測試片培養基區域，並注意是否脫水或污染。2.有效期限標示於外盒，未做用已長菌的測試片則須丟棄，不可使用。3.欲做微生物接種時，操作人員手部需帶塑膠手套並於75%酒精消毒，或以75%酒精直接進行手部消毒，頭部必需戴無塵帽，口部必須帶口罩。
2.微生物培養	以平置方式將測試片放置於培養箱中，設定烘箱溫度與時間：總生菌數溫度設定為35+/-2度C, 培養時間為：24-48小時。	落菌培養面積：20cm2。
3.計算菌落	計算測試片上菌落數目, 表示單位cfu/20cm2(環境落菌為cfu/20cm2, 15min.), 必要時參考原廠提供判讀手冊，計算菌落數。
4.記錄	將檢驗結果記錄於「微生物檢驗記錄表」上。
5.拋棄	培養後測試片可能有生物危害性, 需經過殺菌釜滅菌後處理後再以一般廢棄物丟棄。

四. 水、液狀原料與化粧品檢測總生菌數操作流程

步驟	說明	操作注意事項
1.樣品接種	1.空白測試：1-1.使用二-5.已製備好環境落菌測試片，使用長尾夾夾住測試片前端，並於夾子上方黏貼雙面膠帶。1-2.打開測試片上蓋，使上蓋黏貼於雙面膠上。1-3.進行樣品接種過程中，持續打開，於樣品全部接種後蓋上上蓋。1-4.於測試片背後貼上標籤標示。2.樣品接種：2-1.使用經滅菌玻璃吸管，吸取二-2.或二-6.待測樣品1c.c.。2-2.打開測試片，滴下待測液後將測試片蓋上(若3M測試片須使用塑膠模壓製滴定待測樣位置，將空氣擠出)。2-3.於測試片背後貼上標籤標示。	1.無菌操作檯，需於操作前先經紫外線照射至少1小時後，或用75%酒精噴於四周空間後，再進行檢測。2.無菌室紫外線消毒燈可於每日定時開關。紫外線有害眼睛與皮膚，人員操作前務必注意要關閉。3.使用測試片，不可碰觸測試片培養基區域，並注意是否脫水或污染。4.有效期限標示於外盒，未做用已長菌的測試片則須丟棄，不可使用。5.欲做微生物接種時，操作人員手部需帶塑膠手套並於75%酒精消毒，或以75%酒精直接進行手部消毒，頭部必需戴無塵帽，口部必須帶口罩。
2.微生物培養	以平置方式將測試片放置於培養箱中，設定烘箱溫度與時間：總生菌數溫度設定為35+/-2度C, 培養時間為：24-48小時。
3.計算菌落	計算測試片上紅色菌落數目(colony forming unit, cfu), 必要時參考原廠提供判讀手冊，計算菌落數, 最佳記數範圍在250cfu以內。當菌落超過250cfu時, 可以挑選培養基區任三個方格(共3cm2)中菌落數加總, 再除以3乘以20, 可得到總菌落數估計值。
4.記錄	將檢驗結果依稀釋倍數記錄於「微生物檢驗記錄表」適當欄位中, 單位cfu/ml(或g)。若原始取樣為秤取, 則單位為cfu/g, 若使用吸管吸取, 則單位為cfu/ml。待測樣品中實際落菌數為cfu乘以稀釋倍數(10, 100或更高), 除以取樣培養量(1ml或1g)。
5.拋棄	培養後測試片可能有生物危害性, 需經過殺菌釜滅菌後處理後再以一般廢棄物丟棄。